雜交瘤細胞篩選培養基怎么選擇比較好

在單克隆抗體制備過程中，有兩次的篩選過程，第1次是選出雜交瘤細胞（選擇性培養基）；第二次是進一步篩選產生特異性抗體的雜交瘤細胞。

雜交瘤細胞篩選,優質抗原,抗體,培養基,弗氏免疫佐劑,羊抗雞IgY-雞IgY

　　利用雜交瘤及時制備單克隆抗體的基本原理是根據以下三個原則：

　　1一種淋巴細胞克隆只產生一種抗體；

　　2細胞融合技術產生的雜交瘤細胞可以保持雙方親本細胞的特性；

　　3利用代謝曲線補救機制篩選出雜交瘤細胞，并進行克隆，然后增殖，制備所需的單抗。

　　細胞有正常和替代兩條核苷酸合成途徑，在組織培養中的細胞可利用二者之一，但一般情況下使用正常途徑，只有在正常途徑被抑制以后再啟用替代途徑。在哺乳動物細胞中，核苷酸合成替代途徑的主要酶為次黃嘌呤-磷酸核糖轉移酶（HPRT），其催化嘌呤堿基同磷酸核糖焦磷酸鹽（PRPP）縮合成嘌呤單磷酸核苷酸。

　　黃嘌呤-磷酸核糖轉移酶催化嘌呤堿基同磷酸核糖焦磷酸鹽

　　1,HPRT變異株培養篩選

　　HPRT基因變異株可在含有如8-氮鳥嘌呤（8-GA）一類的嘌呤類似物的培養液中被選擇出來。HPRT能識別8-GA作為底物并且將其變為單磷核苷酸。含有8-AG的核苷酸進一步被加工后摻入到DNA和RNA中，而且有毒性。所以有HPRT酶作用的細胞在8-AG培養液中會死亡，即含有HPRT基因的細胞在該培養液中不能生存。然而，由于HPRT酶是非必需途徑的一部分，HPRT基因變異株仍可生長良好。由于HPRT基因位于X染色體上，其正常突變率高到10-7，所以不需要加入誘變劑，直接使用8-AG處理，108或者更多的細胞即可篩選出HPRT變異細胞株。雜交瘤細胞篩選,優質抗原,抗體,培養基,弗氏免疫佐劑,羊抗雞IgY-雞IgY

　　2，HPRT變異株檢測

　　HPRT缺失的細胞株可用抑制其正常合成核苷酸的途徑的藥物來檢測。在這種環境中，細胞只能依賴其替代途徑合成核苷酸，而HPRT變異株將不能利用替代途徑而死亡。

　　有幾種藥物都可阻斷細胞的正常的核苷酸合成途徑。在雜交瘤細胞中使用較為常見的是重氮絲氨酸（Axaserine），氨基喋呤（Aminopiterin）和氨甲喋呤（Methotrexate）三種。培養基中加入疊氮絲氨酸，氨甲喋呤和氨基喋呤，將阻斷正常嘌呤合成途徑，促使細胞通過替代途徑合成嘌呤核苷酸。用疊氮絲氨酸時阻斷了嘌呤合成，一般加入次黃嘌呤（H），配成AH選擇培養基；當用氨甲喋呤和氨基蝶呤時，嘌呤和嘌呤嘧啶合成途徑被阻斷，應補充次黃嘌呤和胸腺嘧啶，如HMT培養基和HAT選擇培養基。

　　用于融合的骨髓瘤細胞由于是HPRT缺乏株，所以不能利用替代途徑合成核苷酸而在選擇培養基中死亡，而雜合細胞由于具有親本細胞的遺傳特性，可以在培養基中長期存活與繁殖。雜交瘤細胞篩選,優質抗原,抗體,培養基,弗氏免疫佐劑,羊抗雞IgY-雞IgY

　　3，選擇培養基篩選

　　在用選擇培養基如HAT選擇培養1-2天內，將有大量骨髓瘤細胞死亡，3-4天后骨髓瘤細胞消失，雜交細胞形成小集落，HAT選擇培養液維持7-10天后應換HT培養液，之后改用普通培養液。在上述培養期間，雜交瘤細胞布滿孔底1/5面積時，即可開始檢測特異性抗體，篩選出所需要的雜交瘤細胞系。在選擇培養期間，一般每2-3天更換一半培養液。