單克隆抗體兩次篩選的目的和方法到底是什么??

在單克隆抗體制備中兩次提到篩選問題，那么兩次篩選的目的和方法到底是什么。

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　　單克隆抗體制備過程中兩次提到了篩選，對于兩次篩選中的目的和方法許多人也存在疑惑，那么到底是如何篩選的呢？現總結如下：

　　一次篩選:首先在（效應）B淋巴細胞和骨髓瘤細胞進行雜交時可能出現的情況應該先弄清楚，

　�。ㄒ唬┛赡艿那闆r有：

　�。ㄐ�應）B淋巴細胞和（效應）B淋巴細胞的融合

　　(效應）B淋巴細胞和骨髓瘤細胞的融合（即雜交瘤細胞）

　　骨髓瘤細胞和骨髓瘤細胞的融合（即瘤瘤細胞）

　　單個骨髓瘤細胞

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　　單個（效應）B淋巴細胞

　�。ǘ�）篩選的目的————獲得雜交瘤細胞

　�。ㄈ�）篩選的方法

　　用選擇性培養基來完成，即HAT培養基。含有次黃嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶，其中氨基喋呤可阻斷DNA合成的主要途徑。主要途徑阻斷后，依靠應急途徑即在HGPRT（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶）和TK（胸苷激酶）作用下，利用胸腺嘧啶和次黃嘌呤合成DNA，缺少其中一種，DNA合成不能發生。用于雜交的骨髓瘤細胞系均由經有毒藥物誘導而成選擇產生的代謝缺陷型細胞，細胞內均無TK或HGPRT，所以單個或融合骨髓瘤細胞在HAT培養液中將死亡。B細胞雖然有HGPRT和TK，但在體外通常培養條件下，尤其是在單個細胞環境下難于長期存活和增殖傳代。因此只有雜交瘤細胞才能在HAT培養液中生長繁殖。

　　所以通過以上方法可以選擇出雜交瘤細胞，但雖然都是雜交瘤細胞，但可能是同一抗原的不同抗原決定基刺激產生的。所以產生抗體是不純的。如果不進一步提純，這樣得到的是多克隆抗體。所以就有了第二次篩選。

　　第二次篩選要想獲得單克隆抗體，所以必須得到由一個細胞分裂而成的一個細胞群，由這樣的細胞群產生的抗體才是真正意義的單克隆抗體。

　　(一)篩選的目的

　　篩選只針對某一種特定的抗原決定簇產生抗體的雜交瘤細胞，即得到由一個細胞分裂而成的一個細胞群并且能產生所需抗體

　�。ǘ�）篩選的方法

　　1、分離單個細胞置入多孔培養板的每個孔中培養

　　2、檢測每孔細胞是否產生所注射抗原的抗體（即教材插圖中提到的選出<b>能產生特定抗體</b>的細胞群）所以篩選的條件是兩層意思：單個細胞單孔培養保證每個孔中的細胞在產生抗體時是針對同一抗原的同一抗原決定簇產生的的，但每個孔中細胞卻不一定都能產生抗體，把那些不產生抗體的細胞淘汰，對能分泌針對抗原某一決定簇抗體的陽性細胞選擇下來繼續克隆，從而保證大量的生產所需抗體。

　　3、對選擇下來的細胞進行克隆方法有兩種：一種可以在體外培養；一種可以一直到小鼠腹腔中增殖,即可從中提取所需要的單克隆抗體。